Western blot (WB) é
uma técnica utilizada para detectar, quantificar e determinar o tamanho de
proteínas específicas (separando as proteínas pelo seu peso molecular e marcando com anticorpo específico). Este
método surgiu através da técnica Southern
Blot, que é utilizada para detecção de sequências de DNA específicas entre
os fragmentos de DNA que são separados por eletroforese em gel e northern blot, que é usado para
detectar, quantificar o RNA e determinar seu tamanho, e também envolve a
eletroforese em gel para separar o RNA. No final da década de 70, dois grupos
apresentaram duas maneira de executarem a técnica, Towbin et al (1979), utilizaram géis de poliacrilamida-uéria para separar proteínas
e depois serem transferidas para uma membrana de nitrocelulose. Burnette (1981)
posteriormente empregou o uso dos géis de poliacrilamida dodecil sulfato de
sódio (SDS-PAGE), mais utilizados. A técnica também possui outra denominações
como protein blotting ou immunoblotting que rapidamente se tornou uma ferramenta de
grande importância para o estudo das proteínas. Resumindo, o WB consiste
de três etapas: Eletroforese, Transferência e Revelação. A técnica evoluiu muito
até os dias de hoje e os pesquisadores que a utilizam relatam muito problemas e
soluções que encontram na sua prática.
Em breve postaremos detalhadamente cada etapa da técnica de
Western Blot.
Referências:
- Towbin, H., Staehelin, T., & Gordon, J. (1979). Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Procedures and some applications. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States o f America, 76,4350−4354.
- Towbin, H. (2009). Origins of protein blotting. In B. T. Kurien, & R. H. Scofield (Eds.), Methods in molecular biology, protein blotting and detection. vol 536.(pp.1−3). Humana Press: Totowa, New Jersey.
- Burnette, W. N. (1981). Western blotting: Electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A. Analytical Biochemistry , 112, 195−203.
- Burnette, W. N. (2009). In B. T. Kurien, & R. H. Scofield (Eds.), Western blotting: remembrance of past things. Methods in molecular biology, protein blotting and detection, Vol. 536. (pp.5−8). Humana Press.
- http://www.western-blot.us/
